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¿Como se Cuentan los Virus?

¿

Hoy me he pegao todo el día titulando muestras de virus. Estaba ahí, en la cabina de cultivos y , dentro de la rutina, me ha parecido algo curioso para las personas ajenas al mundillo. Y he decidido hacer una entrada sobre ello.

Como quiero meterle también algo audiovisual (que le dará un toquecito especial) necesito algo más de tiempo. Y como soy de naturaleza curioso, me apetecía preguntaros cómo se os ocurre que nos las apañamos para hacerlo.

Que sepáis que me refiero a estimar la cantidad de virus que hay en una muestra, es decir, a su concentración.

Así que hoy, un poquito de feedback con el foro, venga esos comentarios ¡¡¡

PD: A los más entendidos no me vale lo de siempre, quiero alternativas ¡¡¡

Sobre el autor

Lucas Sánchez

comentarios

  • A mí se me ocurre, a bote pronto, un sistema como el que leí una vez que se empleaba para contar cuántos peces hay en un lago:

    1- Se sacan N peces del lago y se marcan de alguna forma. Se devuelven al agua.
    2- Se sacan M peces del lago y se mira cuántos de esos están marcados.
    3- Mediante una técnica estadística que no recuerdo, se estima el número aproximado de peces.

  • A bote pronto he pensado en la espectrofotometría, pero no sé si sirve para los viruses. Tampoco creo que les valga el método de la rejilla ( solución muy diluida que se mira al microscopio con un porta, se van contando las células por cuadrícula y etc, práctica que hice en Fisio con los hematíes dichosos para saber el hematocrito). Ilústranos, ilumínanos, porque hasta que no has hecho la pregunta no me ha dado por pensar en que no conozco un método que me parezca válido para eso…

  • Lo mio es trampa que lo he hecho varias veces, pero por ahora vais un poco desenfocados. Un par de pistas: Poca estadística, es cuestión de contar a mano, visualmente, y hay que esperar un poquito, dependiendo de lo rápido que sea el virus.

    A la hora de explicarlo, con unas fotos de las ****** creo que es más que suficiente, a no ser que utilices métodos más chachiguays que el arquetípico.

  • Frío…Frío… 😉

    A ver si con las pistas de ninguen…que por cierto puede currárselo y pensar como lo haría con virus que no forman ****** 😉

  • ¿Meterles frío de tal manera que se queden paraditos y así, al no moverse, poder contarlos a ojo? En plan: si en un cm cúbico hay tantos viruses, en el total de la muestra hay tanto.

  • Pues yo lo he hecho, pero con el fago lamda que forma ***** (que supongo que es lo que yo me pienso pero no quiero dar pistas) Con virus que no lo forman… valen virus transgénicos o coinfecciones?

  • Todo Vale ¡¡

    Daré más pistas, para saber la cantidad de virus que hay una muestra, no nos vale sólo con el número de virus, puesto que muchas partículas estarán muertas, tenemos que pensar que número de partículas infectivas tenemos ¡¡

  • Podemos poner unas cuantas bacterias y contar las que se infectan en un determinado periodo de tiempo?
    No sé si se nota fácilmente cuando una bacteria es infectada, así que igual estoy diciendo una barbaridad muy grande.

  • Para los que insisten recordar que los virus son demasiado pequeños para ser vistos, salvo que vayamos al microscopio electrónico y eso ya es un poco más coñazo. Sobre ver el número de bacterias infectadas (o células eucariotas lo que sean) no siempre es tan evidente y tenemos el problema de que una vez una célula se infecta ésta produce nuevos virus, y las infecciones secundarias pueden estropear mucho la medida de virus del tubo original… nueva pista

    Buscando métodos alternativos si no forman «eso que varios estamos pensando» (eqvep) no podríamos contar el número de partículas infectivas, pero podría de alguna manera valorar unas muestras de virus frente a otras.

    En un cultivo líquido de sus hospedadores, de tal manera que podamos medir su densidad óptica o en cultivo adherente, simplemente contar las céulas viables. Infectar un número determinado de células y contar el tiempo que tardan en matar la mitad de la células (una especie de semivida de la muestra viral). O realizar una nueva medida de células a las 24 horas y medir la reducción (problema con virus lentos que en 24 horas no hayan matado células todavía)

  • En lo de la coinfección me refería a que si el virus no forma*** porque le falta algun gen o algo se puede hacer una infección previa con otro virus que tengamos y que tampoco forme **** pero que tenga el gen que le falta al otro para poder formarlas. Así sólo tendremos *** dónde esten ambos. También se pueden usar células con dicho gen (pero eso ya depende más del tipo de célula).
    Lo de la producción de más virus por las células infectadas en vez de ser un problema normalmente es la solución… También se cuentan las bacterias por el número de colonias, y una colonia son muchas bacterias, pero como provienen de una sóla…

  • ui yo esto lo hice en micro el año pasado creo!!!!

    Estaríamos hablando (previa preparación claro) de contar a ojo algo (bueno, más bien la ausencia de algo) que se llama igual que la ausencia de pelo? xDDDD Formulita y listos????

    aisss que recuerdos! ese laboratorio que huele a rayos, trabajar junto al calorcito del Bunsen, el riesgo constante de quedarse sin pestañas o flequillo, esos gritos del profe: antes de salir CERRAD la llave del gas!!!!!!!

    Voy muy mal profe???? Me suspendes las prácticas??? ^^’

  • Ah y lo que ha dicho Rinze! (cambio las letras para comodidad de la que escribe xD)

    N es el número total de individuos (lo que quieres saber)
    M son los individuos que capturamos, marcamos y soltamos dentro de N

    Y después hacemos una segunda captura:

    C son los individuos capturados esta segunda vez (marcados + no marcados)
    R individuos capturados marcados

    La proporción de individuos marcados dentro del conjunto de la población es igual a la proporción de individuos marcados de cualquier parte;

    M/N=R/C

    Por lo tanto N= M·C/R

    Prácticas de ecología de 2º; nosotros lo hicimos con alubias 😆

    Me gusta sentir que lo que hago tiene algún sentido en este mundo cruel donde la gente te condena al paro y al McDonalds :ops: Gracias por hacer que me sienta útil xD

  • No sé si esto se considera spam xD pero es que he vuelto a leerlo ^^’

    Garvm no se aleja mucho no?

    «Daré más pistas, para saber la cantidad de virus que hay una muestra, no nos vale sólo con el número de virus, puesto que muchas partículas estarán muertas, tenemos que pensar que número de partículas infectivas tenemos»

    Esto no lo he entendido mucho… Es decir que también hay que contar los virus que no han infectado a «nadie»??? o comor???

  • Pues que si cuentas con una muestra de microscopio o con turbidimetría o algo así cuentas los virus vivos y los muertos, y lo que tu quieres saber son los vivos (que los muertos no le van a infectar a nadie)

  • Bueno antes que nada muchas gracias, no esperaba tanta participación, a partir de ahora os preguntaré cosas más a menudo 😉

    Ninguen está bien pensado, pero sí que se podrían distinguir, ahora mismo lo explico con la contestación de Myriam.

    Myriam no has estado nada descaminada. Sobre todo con los transgénicos. Está claro que no siempre se puede hacer, pero un marcador como la GFP hace que sepas qué células están infectadas y cuales no y a partir de ahí hacer un recuento. Hace falta un número bastante amplio de campos de microscopio donde contar y es un incordio.

    Ahora que para eso no te hacen falta transgénicos, te coges anticuerpos policlonales contra tu virus unidos a un fluoróforo y cuentas tras hacer una inmunofluorescencia (esta es una de las respuestas que pensé que igual salían)..

    Garvm ha dado en el clavo, ese es el espíritu ¡¡ Ya entraremos en detalles con la entrada en la que lo explique todo, pero caliente, caliente.

    Makö no te suspendo las prácticas, tranquila 😉 pero esto no tiene que ver necesariamente con bacterias, casi todo el trabajo con virus se hace en cultivos celulares, en eucariotas. Lo último que no entendías tan bien, lo entenderás mejor con la entrada de la titulación propiamente dicha (gracias a Myriam por ir aclarandolo…)

    Un saludo a todos ¡¡

  • Pero con los anticuerpos verías los vivos y los muertos… o es que son cómo las células que cuándo están muertas dejan entrar el colorante en su interior? Yo en las prácticas lo hacía contando halos de lisis, como si de colonias se tratara… pero ya te digo que con lo de los virus que no hacen halo o usas algo transgénico o estoy más perdida..

  • Al igual que Myriam, yo también lo he hecho pero para fagos, para virus de animales ¿se hace lo mismo pero con cultivos celulares en lugar de con bacterias?.

  • Pues eso, yo iba a decir lo mismo que Myriam y Hel!! Lo hicimos en micro con fagos y bacterias; entonces en los que infectan células eucariotas no se cuentan calvas??? Yo que ayer me emocioné un montón xDDD

  • Cómo se notan esas prácticas de micro!!! jejeje… Yo tengo una especie de reclamación a Sonicando: en el escritorio me sale que pusiste una entrada sobre jefes y ordenadores pero la has debido quitar y ahora me quedo con las ganas de ver la viñeta… con lo que promete… Ponla otra vez please!

  • A ver, ya que ha salido todo.

    En el caso de los fagos lo que se hace es: preparamos unas placas en las que sembramos bacterias (el hospedador) y son inoculadas por muestras de virus que se han preparado diluyendo el virus seriadamente (normalmente a 1/10 cada paso). En las placas dónde hay más virus no crecerá ninguna bacteria, en las que se haya diluido demasiado el virus las bacterias llegarán a crecer. En el medio encontraremos una serie de «calvas», es decir, las bacterias formarán un césped interrumpido por una serie de halos de inhibición en dónde, por efecto del virus no podrán crecer. Cada uno de esos halos provienen de una partícula infecciosa. Después sólo tenemos que contar los halos y multiplicar por el factor de dilución de la placa en cuestión y tendremos el título viral de la muestra inicial.

    En el caso de virus que infectan eucariotas el proceso es similar, simplemente que habrá que teñir las células para que sea evidente a la vista las zonas dónde hayan crecido las células y las zonas en las que no, para evitar las infecciones secundarias las células se fijan con agar(una gelatina), impidiendo el desplazamiento del virus a través del medio. Al menos es el método que utilizamos en mi laboratorio, y el tema del agar es el más peliagudo por que es facilísimo abrasar las células jejeje me he hartado yo de cargarme titulaciones así, con lo que jode fastidiar el trabajo de 3 dias así.

    Hablando de métodos alternativos, se uno de unos chinos que como se empeñan en crecer su virus en unas células que no son las de su huésped, en vez de utilizar el método normal (que sabemos que es imposible que salga en esas células) se inventan una película de la hostia echandole drogas al virus para que no se desplace y cuentan células muertas a ojo.
    Vamos que así les cuesta publicar esa mierda de papers jejeje

  • Maldición, ¡debería haber una vista previa!. La declaración anterior debería haber sido cerrada con un tag «escepticismo paleto».

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Lucas Sánchez (1983)

Nací en Valencia y estudié Bioquímica en la Universidad Autónoma de Madrid. Investigué durante casi 10 años en el Centro Nacional de Biotecnología en el diseño de vacunas para enfermedades prevalentes en el tercer mundo. Durante todos aquellos años tonteé todo lo que pude con el periodismo y la divulgación científica, escribiendo para Público, Materia, Naukas y más recientemente para El País y Radio Nacional de España. Finalmente decidí montar mi propia agencia de comunicación científica: Scienseed.

Fuera del ámbito científico fui guitarrista de los Leftover Lights, banda con la que edité dos discos de estudio “Turning the lights on” (2012) y “Universe” (2014). He escrito una novela que se llama “Impostores” (2012) y, desde entonces, siempre está a puntito de salir la segunda.